产品货号：
HR8310
中文名称：
细胞活性检测试剂盒(红色荧光)
英文名称：
产品规格：
500T|1000T
发货周期：
1～3天
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本试剂盒是应用新型的氧化还原荧光指示剂快速高灵敏度检测细胞活性的产品。通过使用活细胞的还原能力来定量测量细胞活力，作为细胞健康指标。该细胞活力试剂具有广泛的适用性，可用于各种人和动物细胞系、细菌、植物和真菌。
BalBcellProbe C03探针是一种氧化还原指示剂，能根据代谢活性产生荧光信号。其在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性，而在还原状态下，转变为呈粉红或红色荧光的还原产物，其吸收峰为530～560nm，而散射峰为590nm。在细胞增殖过程中，细胞内NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，处于还原环境。摄入细胞内的染料被这些代谢中间体及细胞色素类还原后释放到细胞外并溶于培养基中，使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。最后用荧光酶标仪或荧光光度计进行检测，荧光强度与活性细胞数成正比。
这种染料经过验证安全无毒，用于细胞活性和细胞增殖的定量分析以及细胞因子生物测定和体外细胞毒性研究。这种测定是基于具有代谢活性的细胞将试剂转换成荧光和比色指示剂的能力。受损和无活性细胞具有较低的天然代谢活性，因此对应的信号较低。探针的无毒特性使细胞可长期暴露于这种染料，因此可随时间进行测量或进行终点测量。
与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比，BalBcellProbe C03探针法具有更多的优势。本方法采用单一试剂，可以连续、快速地检测细胞的增生状态。由于探针对细胞无毒、无害，不影响细胞的抗体合成与分泌等活性，因此可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察，因此有操作简便和几乎不干扰细胞正常代谢的特点。
- 使用方便：仅使用单一试剂；
- 对哺乳动物或微生物细胞进行灵敏、无毒且安全的细胞活力和增殖测定；
- 能长期使用，持续进行测定而不损伤细胞或产生有毒废物；
- 灵活、简便-能与多种仪器平台、96和384孔板以及荧光或分光光度法测定兼容；
- 可重复、快速-带加样、孵育及测定方案的同质分析对贴壁和悬浮细胞均有良好的可重复性。
| 组分 | 500T | 1000T |
| BalBcellProbe C03细胞活性探针 | 5mL | 10mL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：2～8℃，避光，有效期1年。
- 本试剂盒长期不用可以-20℃保存。
- 染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
- 染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
- 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完！
| 仪器准备 | 荧光酶标仪/光度计 离心机 移液器 冰箱 冰盒 |
| 试剂准备 | PBS缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））（phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution；With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。Components：CaCl2(anhydrous) 140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous) 48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)） |
| 耗材准备 | 离心管 吸头 一次性手套 荧光检测专用黑色96孔板 |
- 正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入Alamar Blue试剂后的培养时间。
- 合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于96孔板，我们建议每孔接种100微升细胞，细胞浓度范围为：贴壁细胞在100-10,000/孔，悬浮细胞在2000-50000/孔，并以培养基为空白对照。对于384孔板，细胞浓度和接种量均减半。
- 整个过程均应为无菌操作，因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。
- 注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。
- 孵育时，须避光。
- 本制品可以使用荧光或分光光度检测，但荧光的灵敏度高，实验误差小，推荐使用荧光检测。
- 细胞的活性检测，一般可在96孔细胞培养板中进行。
- 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。每孔通常加入103个以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
- 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。通常要给予0～10微升特定的药物或生长因子进行刺激（或其它物理方法处理）。
- 培养结束后，取出BalBcellProbe C03探针试剂，置室温融化混匀，于洁净工作台内按10微升/孔加入微孔板中，在细胞培养箱内继续避光孵育1～24小时，培养液颜色由蓝变为粉红；
- 不同样本孵育时间不同，一般常见1～4小时。
- 检测灵敏度随着孵育时间的延长而增加，细胞数量少的样品应延长孵育时间至24h。
- 细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。温育时间要摸索。
- 不同样本孵育时间不同，一般常见1～4小时。
- 荧光分光光度法检测，激发光波长560nm（在530～570nm之间均可），发射光波长为590nm。
- 荧光检测更为灵敏，无法检测荧光时测定吸光度。
- 测定板或试管可以用铝箔纸包裹，并保存在4℃，然后在1～3天之内检测而不会影响荧光或吸光度值。
- 荧光检测更为灵敏，无法检测荧光时测定吸光度。
将各测试孔的荧光值减去调零孔荧光值或对照孔荧光值。各重复孔的荧光值取平均数。
细胞活力%=((加药细胞F590 -空白F590)/(对照细胞F590 -空白F590))×100
- 为什么荧光值的强度如此之低？
- 尝试增加细胞与探针试剂的孵育时间。
- 改变仪器的“增益”设置，并检查仪器的过滤器/波长设置。确保在实验设计中使用阳性对照（活细胞）进行故障排除。
- 尝试增加细胞与探针试剂的孵育时间。
- 为什么荧光值如此之高以至于超出了线性范围？
尝试减少孵育时间或减少细胞数。 - 观察到高背景荧光值是什么问题？
试剂可能会因暴露在光线下而分解。请务必存放试剂在避光环境中，不要将试剂长时间暴露在直射光下。
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